用途温和裂解细胞提取总蛋白质,主要用于Western,免疫沉淀,免疫共沉淀等，非变性组织细胞裂解液
注意事项：主要由Triton X-100、氯化钠、Tris组成,Triton X-100为最常用的去污剂之一。含有一支1.5ml PMSF。用本裂解液得到的蛋白样品，可以用BCA蛋白定量试剂盒测定蛋白浓度。由于含有较高浓度的去垢剂，不能用Bradford法测定由本裂解液裂解得到样品的蛋白浓度。
储存条件和保质期—20℃,12个月
(一)贴壁培养细胞
1、取 Triton X-100 Lysi s Buffer 室温溶解混匀，加入 PMSF，使 PMSF 终浓度为 1mM。
2、去培养液，用PBS、NS或无血清培养液清洗 1 次，低速离心，弃上清，留取沉淀。
3、按照6孔板每孔加入150～250μl含有PMSF 的裂解液的比例加入Triton X-100 Ly sis
Buffer。移液器轻轻吹打，使裂解液和细胞充分接触。置于冰上或 4℃裂解，通常裂解液作用于细胞1～3s内，细胞就会被裂解。通常6孔板每孔细胞加入150μl 裂解液已经足够，但如果细胞密度非常高可以适当加大裂解液的用量到 200～250μl。
4、10000～12000g，4℃离心5～10min(如无低温离心机，室温下离心亦可)，取上清。
5、进行后续的 SDS-PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。
(二)悬浮培养细胞
1、取Triton X-100 Lysi s Buffer 室温溶解混匀，加入PMSF，使PMSF终浓度为1mM。
2、低速离心悬浮细胞，弃上清，收集沉淀。
3、用手指轻弹细胞，使其松散。按照6孔板每孔细胞加入150～250μl 含有PMSF的裂解液的比例，加入Leagene Triton X-100 Lysi s Buffer。通常6孔板每孔细胞加入150μl裂解液已经足够，但如果细胞密度非常高可以适当加大裂解液的用量到200～250μl。再用手指轻弹以充分裂解细胞，充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。
4、10000～12000g， 4℃离心5～10min(如无低温离心机，室温下离心亦可)，取上清。
5、进行后续的 SDS-PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。
1、取TritonX-100LysisBuffer室温溶解混匀后，加入PMSF，使PMSF终浓度为1mM。
2、把组织剪切成细小的碎片，越小越好。
3、取在液氮或超低温冰箱中冷冻30min以上的组织，迅速用液氮研磨，研磨过程尽量控制在1～2min之内，以减少蛋白的降解。
4、按照每20mg组织加入150～250μl裂解液的比例加入含有PMSF的裂解液。冰上或4℃裂解15～30min。
5、步骤3、4亦可以采用如下过程：按照每20mg组织加入150～250μl裂解液的比例加入含有PMSF的TritonX-100LysisBuffer。用玻璃匀浆器或组织研磨器匀浆，直至充分裂解，该过程尽量控制在1～2min之内，以减少蛋白的降解。
6、10000～12000g，4℃离心5～10min(如无低温离心机，室温下离心亦可)，取上清。
7、进行后续的PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。
